实验原理/Experimental principle
在电场作用下,凝胶中带负电荷的蛋白质从阴极向阳极迁移,并被吸附到紧贴凝胶的PVDF或硝酸纤维素膜上。本缓冲液维持适宜的pH环境(约pH 8.3-9.0),确保蛋白质带负电荷并保持溶解状态。
技术流程/Procedure
1. 1 L快速转膜缓冲液(1×) 配制:取100 mL本产品于200 mL无水乙醇中,再用去离子水 或超纯水定容至1 L,混匀后即可使用;
2. 做好转印三明治结构,转移至电泳槽中,设置恒流600 mA,转印15~30 min即可完成 蛋白转膜。
注意:(1)PVDF膜使用前需要用无水甲醇或无水乙醇活化30 s以上;
(2)恒流600mA条件下,转印30 min,1.0 mm厚的10%浓度分离胶中180 kDa以下蛋白可完全转印;恒流400mA条件下,转印40 min,1.5 mm厚的10%浓度分离胶中130 kDa以下蛋白可完全转印。如使用其他浓度的分离胶,建议转印时间适当延长或缩短5~10 min;
(3)对于无法达到恒流600 mA的电源,可设置400 mA,转印40 min左右可完成1.5 mm厚的10%浓度分离胶中130 kDa以下蛋白转印。
产品优势/Highlights
✪ 高效便捷
恒流600mA,仅需15~30min即可完成转膜 (湿转法),产热量小,无需冰浴;
✪ 安全无毒
避免使用有毒试剂,无异味,无刺激性气体;
✪ 兼容性强
适用于预制胶、Bis-Tris胶等各种常见凝胶的转膜。