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                    RNA荧光原位杂交(RNA-FISH)
RNA荧光原位杂交(RNA-FISH)
定性分析
定量分析
灵敏高效
周期短
服务特色
安全、快速、灵敏度高、探针保存时间长、能同时显示多种颜色。
服务介绍
服务流程
客户提供
交付内容
服务说明
常见问题

服务介绍/Introduction 

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,具有安全、快速、灵敏度高、探针保存时间长、能同时显示多种颜色等优点。

RNA-FISH的原理为:如果待检测的细胞或组织切片上的靶核酸与所用的核酸探针是同源互补的,二者经变性-退火-复性,即可形成靶核酸与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素或直接标记荧光素,可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应或直接经荧光检测体系在镜下对待测核酸(mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA)进行定性、半定量或相对定位分析的一种实验方法。

RNA荧光原位杂交(RNA-FISH)试剂盒-56.jpg

RNA荧光原位杂交(RNA-FISH)试剂盒-55.jpg

特色服务 

基因表达定量与定位:单分子检测、mRNA及lncRNA亚细胞定位;

 转录动力学研究:新转录RNA转录活性实时监测;

✪ 疾病机制与诊断:肿瘤标志物检测、病毒RNA示踪、异常RNA剪切、定位错误;

✪ 技术联用与拓展:同时标记多种RNA分子,绘制单细胞转录组图谱;联合免疫荧光,在同一细胞中检测特定RNA及与其相互作用的蛋白质;

✪ 特殊应用:低丰度RNA检测、活细胞成像。

 

特色服务 

 ✪ 全流程服务:服务涵盖全流程实验,高效完整; 

 ✪ 个性化方案:根据实验目的提供专属实验方案及解决方案; 

 ✪ 完整数据链:详实的试验记录、完整的原始数据及详细的技术检测报告,为您的科研保驾护航; 

 ✪ 超长的售后:1年超长售后,含样本保存及疑问解答等。

服务流程/service process

服务流程图3.png

客户提供/Customer provides

送样要求

✪  组织:新鲜或固定(10%中性甲醛、4%多聚甲醛)组织样本;

✪ 细胞:新鲜(大于106)或固定(10%中性甲醛、4%多聚甲醛)细胞样本;

✪ 切片:石蜡切片,冰冻切片以及细胞爬片,涂片;

✪ 实验信息:基因名称及ID。

注:特殊条件及样品请详询。

交付内容/Delivered content

染色后的切片;

✪ 探针序列;

✪  所有原始数据;

✪  检测实验报告。

注:以上均为常规提供,特殊要求请详询。

服务说明/Service Specification

RNA FISH.png

常见问题/Service Specification

Q: 原位杂交阴性对照正常、但实验组结果重复性差怎么解决?
A: 实验组原位杂交结果时好时坏、重复性差,多源于切片厚薄不均、固定时间批次不一、杂交孵育湿度温度不统一、探针批次差异及操作手法不标准;需统一切片厚度、标准化组织固定与脱蜡流程,固定恒温湿盒参数、统一探针批号与工作浓度,关键实验设置多张组织平行切片及生物学重复,全程操作流程规范化,保证结果稳定可重复。
Q: 探针保存容易降解,怎么存放才能长期稳定?
A: 探针易受温度、反复冻融、核酸酶污染发生降解,直接导致杂交信号减弱或实验失败;探针需分装避光保存避免反复冻融,短期 4℃冷藏、长期 - 80℃避光存放,配制和稀释全程使用无酶耗材与缓冲液,避免室温长时间放置,最大程度维持探针完整性与杂交活性。
Q: 冰冻切片原位杂交比石蜡切片更容易出问题,要注意什么?
A: 冰冻切片含水量高、组织结构松散,做原位杂交更易出现脱片、背景高、RNA 降解等问题,主要源于速冻固定不规范、未充分脱水、内源酶未灭活、孵育易干片;实验需快速速冻减少核酸降解,梯度充分脱水通透,加强内源性磷酸酶 / 过氧化物酶灭活,湿盒全程保湿孵育,降低洗涤强度避免组织破损,适配冰冻切片特性优化整套流程。
Q: 温度不好把控,温度偏差对结果影响大吗?
A: 杂交温度是决定探针与靶序列特异性结合的核心因素,温度过高会导致探针结合力下降、信号显著减弱甚至无信号,温度过低则会大幅增加非特异结合、背景杂乱升高;需根据探针长度和 GC 含量参考标准体系设定适宜杂交温度,全程使用恒温湿盒保证温度稳定,避免环境温差干扰杂交特异性。
Q: 蛋白酶 K 消化怎么把控,过消化和消化不足有什么影响?
A: 蛋白酶 K 消化是原位杂交关键步骤,消化不足会导致靶核酸被蛋白包裹无法与探针结合造成无信号,消化过度又会破坏组织结构、造成切片破碎脱落且背景升高;实操需根据组织类型梯度摸索合适浓度与孵育时间,采用低温温和消化,消化后及时终止反应,兼顾靶位点暴露与组织结构完整性。
Q: 原位杂交出现非特异杂信号、斑点杂乱怎么排除?
A: 原位杂交出现大量杂乱杂点与非特异信号,多为探针自身非特异结合、杂交体系盐离子浓度不适、洗涤条件过弱、组织残留杂质未清理以及探针降解所致;可重新优化杂交缓冲液离子配比,提高洗涤严谨度与严谨度,使用纯化后的完整探针避免降解,设置正义探针阴性对照扣除非特异斑点,精准区分真实靶标信号与杂信号。
Q: 组织切片容易脱落、漂片严重是什么原因?
A: 石蜡或冰冻切片做原位杂交时易脱落漂片,主要是载玻片未做黏附处理、固定时间不足、脱蜡水化流程过快、蛋白酶消化过度破坏组织结构;实验需提前用多聚赖氨酸或 APES 处理玻片增强黏附性,规范组织固定时长,放慢脱蜡水化梯度步骤,调低蛋白酶 K 浓度并缩短消化时间,减少组织结构损伤,避免切片脱落。
Q: 原位杂交背景很高、整片非特异着色严重如何解决?
A: 原位杂交整体背景偏高、非特异着色明显,主要是预杂交封闭不充分、探针浓度过高、洗涤严谨度不够、组织内源性酶或生物素干扰以及孵育过程干片造成;可延长预杂交封闭时间降低非特异结合,适当稀释探针工作浓度,严格按梯度温度和盐浓度进行严谨洗涤,提前做内源性酶灭活处理,全程保持湿盒保湿避免干片,能有效压低背景、提升特异信号对比度。
Q: 原位杂交完全无杂交信号,探针孵育后没有阳性显色怎么办?
A: 原位杂交无任何阳性信号,多由样本固定不当、组织过度脱蜡、探针变性不充分、杂交温度与时间不合适、蛋白酶消化不足导致靶核酸无法暴露;实验需控制 4% 多聚甲醛适度固定,保证组织彻底梯度脱蜡,探针经高温变性后再复性,严格设置适宜杂交温度并保证足够孵育时长,优化蛋白酶 K 消化浓度与时间充分暴露靶位点,同时设置阳性组织对照排查探针有效性,即可正常出现特异性杂交信号。
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