服务介绍/Introduction
GST pull-down基于“蛋白标签-亲和配体”之间的亲和作用(诱饵蛋白、靶蛋白需要融合不同标签,通常选择GST-诱饵蛋白、His-靶蛋白),在体外条件下调取GST标签目标蛋白及其互作复合体,即在样本外把带标签的目标蛋白纯化出来,然后与目标样本共孵育,在体外形成“GST融合蛋白-互作蛋白”蛋白复合物,再利用GST标签亲和介质(谷胱甘肽磁珠/琼脂糖珠)调取复合物,并通过SDS-PAGE检测已知互作蛋白,或利用质谱技术鉴定未知结合蛋白。
此外,若目标蛋白带有His标签,也可基于类似原理,借助镍柱进行His pull down实验。


适用场景
✪ 验证蛋白直接互作:体外纯化GST-诱饵蛋白、His-靶蛋白,共孵育后用Western blot验证两个蛋白之间是否存在直接相互作用;
✪ 筛选未知互作蛋白:利用GST-诱饵蛋白捕获细胞/组织裂解液中的结合蛋白复合物,联合质谱技术,批量鉴定与诱饵蛋白相结合的全新互作蛋白;
✪ 探究互作机制:对诱饵蛋白进行点突变、翻译后修饰改造、功能结构域截短/缺失构建,再结合Western blot或质谱检测,明确修饰位点、结构域对蛋白结合能力的调控;
✪ 信号通路与分子机制研究:体外还原信号通路中的蛋白结合反应,分析通路上下游激酶-底物、衔接蛋白之间的直接互作关系,阐明信号传导、细胞生命活动背后的分子基础。
特色服务
✪ 全流程服务:服务涵盖质粒构建、蛋白纯化、pull down前检测等全流程实验,高效完整;
✪ 个性化方案:根据实验目的提供专属实验方案及解决方案;
✪ 完整数据链:详实的试验记录、完整的原始数据及详细的技术检测报告,为您的科研保驾护航;
✪ 超长的售后:1年超长售后,含样本保存及疑问解答等。
服务流程/service process

客户提供/Customer provides
样品信息
✪ 诱饵蛋白信息:名称+物种/登录号/序列/大小等;或者原核表达质粒,≥1 μg;
✪ 抗体:抗体≥10 μg/样;
注:若需我方提供抗体或构建质粒,请明确目标蛋白名称、种属等基本信息。
送样要求
✪ 细胞:3×107细胞,离心后收集细胞沉淀,干冰运输;
✪ 组织:≥0.5 g,离体后液氮速冻并-80 ℃冻存,干冰运输;
✪ 纯化蛋白:≥50 μg/样,纯度≥ 90%;,干冰运输;
✪ 抗体及基因模板:密封,干冰寄送。
注:特殊条件及样品请详询。
交付内容/Delivered content
✪ 表达质粒1 μg;
✪ 纯化蛋白1mg(易表达蛋白);
✪ 所有原始数据;
✪ 质谱鉴定报告;
✪ 检测实验报告。
注:以上均为常规提供,特殊要求请详询。
服务说明/Service Specification

常见问题/Service Specification