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                    GST/His pull-down
GST/His pull-down
验证直接互作
互作机制研究
信号转导研究
疾病机制研究
服务特色
GST/His pull down是体外研究蛋白互作的金标准。博福乐的技术服务使用特异性二抗进行检测,能有效避免抗体重链对结果的信号干扰,显著提升检测效果。
服务介绍
服务流程
客户提供
交付内容
服务说明
常见问题

服务介绍/Introduction 

GST pull-down基于“蛋白标签-亲和配体”之间的亲和作用(诱饵蛋白、靶蛋白需要融合不同标签,通常选择GST-诱饵蛋白、His-靶蛋白),在体外条件下调取GST标签目标蛋白及其互作复合体,即在样本外把带标签的目标蛋白纯化出来,然后与目标样本共孵育,在体外形成“GST融合蛋白-互作蛋白”蛋白复合物,再利用GST标签亲和介质(谷胱甘肽磁珠/琼脂糖珠)调取复合物,并通过SDS-PAGE检测已知互作蛋白,或利用质谱技术鉴定未知结合蛋白。

此外,若目标蛋白带有His标签,也可基于类似原理,借助镍柱进行His pull down实验。

GST pull down.jpg

磁珠法GST pull-down试剂盒-37.jpg

 适用场景

 ✪ 验证蛋白直接互作:体外纯化GST-诱饵蛋白、His-靶蛋白,共孵育后用Western blot验证两个蛋白之间是否存在直接相互作用;

 ✪ 筛选未知互作蛋白:利用GST-诱饵蛋白捕获细胞/组织裂解液中的结合蛋白复合物,联合质谱技术,批量鉴定与诱饵蛋白相结合的全新互作蛋白;

 ✪ 探究互作机制:对诱饵蛋白进行点突变、翻译后修饰改造、功能结构域截短/缺失构建,再结合Western blot或质谱检测,明确修饰位点、结构域对蛋白结合能力的调控;

 ✪ 信号通路与分子机制研究:体外还原信号通路中的蛋白结合反应,分析通路上下游激酶-底物、衔接蛋白之间的直接互作关系,阐明信号传导、细胞生命活动背后的分子基础。

 

 特色服务 

 ✪ 全流程服务:服务涵盖质粒构建、蛋白纯化、pull down前检测等全流程实验,高效完整; 

 ✪ 个性化方案:根据实验目的提供专属实验方案及解决方案; 

 ✪ 完整数据链:详实的试验记录、完整的原始数据及详细的技术检测报告,为您的科研保驾护航; 

 ✪ 超长的售后:1年超长售后,含样本保存及疑问解答等。

服务流程/service process

服务流程图3.png

客户提供/Customer provides

样品信息

诱饵蛋白信息:名称+物种/登录号/序列/大小等;或者原核表达质粒,≥1 μg;

抗体:抗体≥10 μg/样;

注:若需我方提供抗体或构建质粒,请明确目标蛋白名称、种属等基本信息。


送样要求

✪  细胞:3×107细胞,离心后收集细胞沉淀,干冰运输;

组织:≥0.5 g,离体后液氮速冻并-80 ℃冻存,干冰运输;

纯化蛋白:≥50 μg/样,纯度≥ 90%;,干冰运输;

抗体及基因模板密封,干冰寄送。

注:特殊条件及样品请详询。

交付内容/Delivered content

✪ 表达质粒1 μg;

✪ 纯化蛋白1mg(易表达蛋白);

✪ 所有原始数据;

✪ 质谱鉴定报告;

✪ 检测实验报告。

注:以上均为常规提供,特殊要求请详询。

服务说明/Service Specification

GST pull down.jpg

常见问题/Service Specification

Q: 分子互作结果无法重复、时有时无,怎么破?
A: 分子互作实验结果难以重复、信号时有时无,核心原因在于细胞批次与代数差异、实验操作未标准化、样本状态不稳定以及弱相互作用易受环境条件波动影响;可通过统一使用同一批次、相同代数的细胞,严格在 4℃、14000 g 条件下裂解 15 min,把控孵育时长并保持全程持续旋转,磁珠提前预洗两次,选用同一批号抗体,关键实验至少设置三次生物学重复与技术重复,以此实现实验流程标准化,保证结果稳定可重复。
Q: GST pull-down 完全拉不下互作蛋白,但文献 / 预测说有互作?
A: GST 融合蛋白折叠错误 / 不溶、标签影响构象、缓冲条件不对、体外互作弱。GST 蛋白低温诱导 + 可溶性标签(如 MBP)、用接近生理 pH(7.2–7.5)、降低盐浓度、梯度增加诱饵蛋白量、加0.1 mg/mL BSA减少非特异吸附。
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