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                    双分子荧光互补(BiFC)
双分子荧光互补(BiFC)
蛋白间相互作用
高特异性
高灵敏度
试用于多种生物体系
服务特色
双分子荧光互补技术是指通过具有相互作用亲和力的两个蛋白质,将分别与其相连的荧光蛋白片段拉近,组装成完整的荧光蛋白,从而表征蛋白质相互作用的发生及其空间位置。
服务介绍
服务流程
客户提供
交付内容
服务说明
常见问题

服务介绍/Introduction 

双分子荧光互补(Bimolecular Fluorescent Complimentary,BiFC)技术基于蛋白质片段互补的原理,用于研究蛋白质间的相互作用。具有能在活细胞内直接观察蛋白质相互作用、高特异性、可检测弱或瞬时相互作用等优势。

其原理是将荧光蛋白(如绿色荧光蛋白GFP、黄色荧光蛋白YFP等)切割为两个互补但各自不发光的片段(如N端和C端片段),分别与待检测的蛋白质A和B融合表达。当蛋白质A与蛋白质B在细胞内发生相互作用时,荧光蛋白片段靠近并重组为完整的荧光蛋白,从而在显微镜下产生荧光信号,直观地反映了蛋白质间的相互作用。

BiFC.jpg

 适用场景

蛋质互作验证:在活细胞内直观地检测两种蛋白质是否互作,既能验证已知的互作关系,也能筛选发现新的互作蛋白;

✪ 亚细胞定位分析:通过分析荧光信号位置,判断蛋白复合物互作位置;

✪ 弱或瞬时互作研究通过稳定延伸的荧光信号,“锁定”并捕捉那些在传统生化方法中容易被洗脱的微弱或瞬间的蛋白质结合事件;

✪ 疾病机制与药物筛选:通过观察药物处理后荧光信号的变化,直观监测病毒蛋白与宿主靶点的结合,或高通量筛选干扰特定蛋白互作的小分子化合物。

 

 特色服务 

 ✪ 全流程服务:服务涵盖质粒构建及提取、转染、实验前WB检测等全流程实验,高效完整; 

 ✪ 个性化方案:根据实验目的提供专属实验方案及解决方案; 

 ✪ 完整数据链:详实的试验记录、完整的原始数据及详细的技术检测报告,为您的科研保驾护航; 

 ✪ 超长的售后:1年超长售后,含样本保存及疑问解答等。

服务流程/service process

服务流程图3.png

客户提供/Customer provides

样品信息

目的蛋白信息:名称+物种/登录号/序列/大小等;

质粒:抗体≥2 μg/样;

克隆模板:≥5μL,浓度100 ng/μL;

注:若需我方构建质粒,请明确目标蛋白名称、种属等基本信息。


送样要求

✪  质粒≥2 μg/样;冰袋运输;

✪  菌液:菌液量应≥0.5 mL,放置⼀年以上的⽢油菌需活化后送样;低温运输;

✪  克隆模板≥5μL,浓度≥100 ng/μL;需含测序报告;干冰运输;

注:特殊条件及样品请详询。

交付内容/Delivered content

✪ 表达质粒1 μg;

✪ 所有原始数据;

✪ 互作成像分析;

✪ 检测实验报告。

注:以上均为常规提供,特殊要求请详询。

服务说明/Service Specification

BiFC.jpg

常见问题/Service Specification

Q: 分子互作结果无法重复、时有时无,怎么破?
A: 分子互作实验结果难以重复、信号时有时无,核心原因在于细胞批次与代数差异、实验操作未标准化、样本状态不稳定以及弱相互作用易受环境条件波动影响;可通过统一使用同一批次、相同代数的细胞,严格在 4℃、14000 g 条件下裂解 15 min,把控孵育时长并保持全程持续旋转,磁珠提前预洗两次,选用同一批号抗体,关键实验至少设置三次生物学重复与技术重复,以此实现实验流程标准化,保证结果稳定可重复。
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