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                    DNA pull-down
DNA pull-down
高特异性
定量分析
高通量分析
低样本量
服务特色
DNA pull-down技术是研究DNA-蛋白质相互作用和调控的有力工具,有助于揭示基因调控网络、信号传导途径和疾病机制等方面的重要信息。
服务介绍
服务流程
客户提供
交付内容
服务说明
常见问题

服务介绍/Introduction 

DNA pull down是用于分析蛋白质与DNA互作的一种分析技术。一般来说,该实验首先需要针对待研究目的基因的调控区域设计并制备特异性探针(以脱硫生物素标记为主流);同时,制备细胞核提取物;将探针和核提取物共同孵育,DNA结合蛋白就会和靶向序列特异性结合;然后,通过亲和素磁珠纯化蛋白质DNA复合物;最后针对获得的蛋白,使用WB验证或者质谱方式鉴定蛋白质类型。

本平台的DNA pull down技术能够高度特异地富集与目标DNA序列相互作用的蛋白质,具有较低的背景干扰,可对DNA-蛋白质相互作用进行定量分析,还可同时研究多个DNA-蛋白质相互作用。此外,可在体外和体内研究,适用于各种生物体系和细胞类型。

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 适用场景

基因调控研究:研究转录因子与基因启动子的结合,揭示基因调控机制和转录调控网络;

✪ 信号传导研究:研究信号传导途径中的关键蛋白质与DNA的相互作用,如激活因子、抑制因子等;

✪ 疾病机制研究:研究与疾病相关的基因突变位点或调控元件的结合蛋白,帮助揭示疾病的发生和发展机制,为疾病的诊断和治疗提供理论依据;

✪ 药物开发:筛选与特定DNA序列结合的小分子化合物或药物,帮助寻找新的药物靶点和开发潜在的药物治疗方法;

✪ 基因组学研究:比较不同物种、不同组织或不同条件下的DNA-蛋白质相互作用,帮助理解基因组的进化、组织特异性和环境适应等方面的变化。

 

 特色服务 

 ✪ 全流程服务:服务涵盖全流程实验,高效完整; 

 ✪ 个性化方案:根据实验目的提供专属实验方案及解决方案; 

 ✪ 完整数据链:详实的试验记录、完整的原始数据及详细的技术检测报告,为您的科研保驾护航; 

 ✪ 超长的售后:1年超长售后,含样本保存及疑问解答等。

服务流程/service process

服务流程图3.png

客户提供/Customer provides

样本信息

✪  蛋白信息:名称+物种/登录号/序列;

✪  抗体信息:10 μL/样,需明确物种信息、稀释比等;


送样要求

✪  基因模板:基因片段≥ 5μL,浓度≥50 ng/μL;干冰运输;

  组织:动物组织≥0.5 g;植物组织≥1 g;新鲜取材,干冰运输;

✪  质粒:≥4 μg/样;需提供测序结果及抗性等信息;干冰运输;

✪  甘油菌:50 μL/样;保存1年以上的甘油菌需进行活化后送样;冰袋运输;

✪  细胞:≥ 3×107/样;离⼼后收细胞沉淀,沉淀体积约为80-100 μL;干冰运输;复苏细胞常温运输;

✪  基因组DNA:≥ 20 μL/样;无其他核酸污染,需提供序列,OD260/280=1.8-1.9,OD260/230=1.9-2.2;干冰运输。

注:特殊条件及样品请详询。

交付内容/Delivered content

✪  目的基因的质粒1 μg,测序报告;

  • ✪  SDS-PAGE银染图;

✪  所有原始数据;

✪  检测实验报告。

注:以上均为常规提供,特殊要求请详询。

服务说明/Service Specification

DNA pull down.png

常见问题/Service Specification

Q: 分子互作结果无法重复、时有时无,怎么破?
A: 分子互作实验结果难以重复、信号时有时无,核心原因在于细胞批次与代数差异、实验操作未标准化、样本状态不稳定以及弱相互作用易受环境条件波动影响;可通过统一使用同一批次、相同代数的细胞,严格在 4℃、14000 g 条件下裂解 15 min,把控孵育时长并保持全程持续旋转,磁珠提前预洗两次,选用同一批号抗体,关键实验至少设置三次生物学重复与技术重复,以此实现实验流程标准化,保证结果稳定可重复。
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