服务介绍/Introduction
甲基化修饰是蛋白质与核酸调控的重要表观遗传机制,主要包括DNA甲基化、RNA甲基化(如m⁶A)及蛋白质赖氨酸/精氨酸甲基化。该修饰通过甲基转移酶将甲基基团共价连接至特定残基,参与调控基因表达、染色质状态、RNA稳定性、蛋白质相互作用及信号通路转导等关键生物学过程。
本平台提供专业的甲基化检测与分析服务,支持细胞、组织及临床样本等多种生物材料。针对蛋白质甲基化,采用泛甲基化抗体富集结合高分辨率质谱(LC-MS/MS)策略,或通过免疫共沉淀(Co-IP)联合Western blot对目标蛋白的甲基化状态进行定性、半定量及修饰位点解析;针对DNA/RNA甲基化,可提供亚硫酸盐测序(BSP)、MeRIP-seq及定量PCR等方案。适用于表观遗传调控、干细胞分化、肿瘤发生机制、神经发育与退行性疾病、免疫与代谢研究等领域,结果稳定可靠。

适用场景
✪ 基础科研:研究甲基化对信号转导及生理功能的调控;
✪ 疾病机制:揭示异常甲基化在癌症发生发展、发育与再生医学及神经与免疫疾病中的作用;
✪ 药物开发:研究甲基化修饰促癌机制、免疫逃逸机制,发现相关疾病靶点。
特色服务
✪ 基础质量评估:对质谱数据进行全面评估,涵盖数据完整性、准确性及可靠性等多维度考量,精准鉴定样本中的蛋白质,并实现定量分析,为后续研究奠定坚实的数据基础。
✪ 功能通路解析:运用GO和 KEGG分析手段,分析甲基化修饰蛋白的功能特性,揭示其潜在作用机制。
✪ 蛋白互作与结构解析:分析甲基化修饰蛋白的互作网络,并分析修饰位点所在的结构域,从结构层面理解糖基化修饰对蛋白功能的影响。
服务流程/service process

客户提供/Customer provides
样品信息
✪ 目标蛋白:含名称、分子量大小等;
✪ 抗体信息:目标蛋白特异性抗体,≥10 μg/样;甲基化抗体或泛甲基化抗体,≥10 μg/样(需明确使用比推荐);
注:若需我方提供抗体,请明确目标蛋白名称、种属等基本信息。
送样要求
✪ 细胞:1×107个细胞,离心后收集细胞沉淀;干冰运输。
✪ 组织:动物组织不少于0.5 g;植物组织不少于1 g;干冰运输。
✪ 样品:已提取的高纯度蛋白样品 ≥ 500 μg(需添加甲基转移酶抑制剂或去甲基化酶抑制剂,提供定量结果);干冰运输。
✪ 血液样品:≥ 2 mL全血(EDTA或肝素抗凝);干冰运输。
✪ DNA样本:用于DNA 甲基化检测。已提取的基因组 DNA ≥1 μg,纯度 A260/A280 = 1.8~2.0,冰袋或干冰运输;干冰运输;
✪ RNA 样本:用于RNA m⁶A 甲基化检测。已提取的总 RNA ≥10 μg(建议 RIN ≥7),完整性良好,液氮速冻。干冰运输。
✪ 阳性参照:对照蛋白样本或细胞裂解物,用于验证实验体系。
注:特殊条件及样品请详询。
交付内容/Delivered content
✪ 全部原始数据
✪ 灰度值分析图
✪ 质谱分析图谱
✪ 检测实验报告
服务说明/Service Specification

常见问题/Service
Specification
Q:
多抗做 WB 时,条带总是有非特异性信号,该怎么优化?
A:
多抗检测容易出现非特异性背景干扰,可从多个实验环节进行优化改善:通过梯度稀释一抗筛选出最佳工作浓度,适当延长封闭时长并选用含 0.1% Tween-20 的封闭液,同时增加 TBST 洗涤次数以有效降低背景干扰;选用脱脂奶粉或 BSA 进行封闭时,需留意抗体适配性与交叉反应问题,尤其是磷酸化抗体应避免使用牛奶封闭,必要时可直接更换特异性更强的单克隆抗体,从根源减少非特异性杂信号。
Q:
WB 条带中间出现白色圆圈(白圈),该怎么解决?
A:
WB 条带出现白圈现象,大多是转膜过程中产生气泡所造成,主要是转膜组装三明治结构时胶与膜之间残留气泡,阻碍了蛋白正常转移,也可能是转膜温度过高滋生气泡或是膜活化不充分所致;实验组装时需用玻璃棒轻轻滚压彻底排尽气泡,同时采用预冷转膜缓冲液,并全程在冰浴条件下进行转膜操作即可避免该问题。
Q:
WB 条带出现 “微笑 / 皱眉” 形状,是什么问题?
A:
WB 条带出现变形多与电泳操作环节密切相关,主要原因包括凝胶配制时聚合不均匀或内部残留气泡、电泳电压过高使凝胶发热造成蛋白迁移不均,以及上样量过大或样本盐浓度偏高干扰正常迁移速率;实际实验中可通过降低电泳运行电压、保证凝胶充分完全聚合、优化样本缓冲液配比等方式,有效改善条带变形的问题。
Q:
WB 条带位置和预期分子量不符,该怎么排查?
A:
条带位置偏差的常见原因:① 蛋白存在翻译后修饰(如糖基化、磷酸化),会导致分子量偏移;② 存在转录异构体或蛋白剪切产物;③ 凝胶浓度选择不当(如小分子蛋白用高浓度胶);④ 电泳条件不稳定,导致迁移率异常。可结合文献和阳性对照验证条带特异性。
Q:
WB 条带出现很多杂带,是什么原因?
A:
WB 实验中条带出现杂带的主要成因包括:一抗特异性较差,存在非特异性结合;一抗或二抗浓度过高,导致非特异性信号增强;封闭不彻底,膜上的非特异性位点未被有效封闭;样本中蛋白发生降解或存在非特异性杂蛋白干扰;以及电泳时上样量过大,超出了抗体的识别能力。针对这些问题,可通过梯度稀释抗体找到最佳工作浓度、优化封闭条件以减少非特异性结合、增加样本纯化步骤来去除杂质,从而有效改善杂带问题。
Q:
WB 背景很高、整片发黑,该怎么解决?
A:
WB 实验中背景信号过高通常与封闭、抗体孵育及洗涤环节相关:首先要排查封闭是否充分,可通过延长封闭时间(如延长至 2 小时)或更换封闭液改善,例如使用 BSA 替代脱脂奶粉,避免内源性磷酸酶对磷酸化抗体检测的干扰;其次可能是抗体浓度过高,可适当降低一抗与二抗的稀释比例,减少非特异性结合;此外洗涤不充分也会导致背景升高,建议增加 TBST 的洗涤次数并延长每次洗涤的时间;最后还需注意实验操作的规范性,避免用手直接接触膜,使用干净的耗材,防止膜被污染而造成背景异常。
Q:
WB 条带信号很弱,如何增强信号?
A:
可以从以下环节优化:
① 增加蛋白上样量(确认样本无降解);
② 降低一抗稀释比例,延长 4℃孵育时间;
③ 优化转膜条件,确保蛋白高效转移;
④ 使用灵敏度更高的发光试剂;
⑤ 调整曝光时间,或改用荧光 WB 系统提升检测限。
Q:
WB 实验中完全没有条带信号,可能是什么原因?
A:
常见原因包括:
① 目的蛋白在样本中表达极低或不表达;
② 蛋白降解(未加足量蛋白酶抑制剂、反复冻融);
③ 转膜失败(蛋白未转移到膜上或转过凝胶);
④ 一抗 / 二抗不匹配、浓度过低或孵育时间不足;
⑤ 曝光时间过短或检测系统灵敏度不足。可通过加入阳性对照、优化转膜条件和抗体浓度排查。