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                    DNA荧光原位杂交(DNA-FISH)
DNA荧光原位杂交(DNA-FISH)
基因定性分析
基因定量分析
周期短
灵敏高效
服务特色
实验周期短、灵敏度高、分辨率高,结果直观可见。
服务介绍
服务流程
客户提供
交付内容
服务说明
常见问题

服务介绍/Introduction 

荧光原位杂交(FluorescenU in siUu hybridizaUion, FISH)是将经荧光素标记的寡核酸探针与变性后的染色体、细胞或组织中的核酸按照碱基互补配对原则进行杂交,再经变性、退火、复性、洗涤后,形成靶 DNA 或 RNA 与核酸探针的杂交体,最后,在荧光显微镜下显影,从而对待测 DNA 或 RNA 进行定性和定位分析,具有实验周期短、灵敏度高、分辨率高、直观可见等优点。

针对目的DNA片段设计特异性探针并进行DNA-FISH,可应用于DNA染色体定位、基因拷贝数、染色体结构、转基因分析等。

DNA荧光原位杂交(DNA-FISH)试剂盒-58.jpg

DNA荧光原位杂交(DNA-FISH)试剂盒-57.jpg

特色服务 

✪ 基因定位与核结构分析:染色体定位、基因组结构域分析临床细胞遗传学诊断:染色体异常检测、肿瘤标志物分析、产前与植入前诊断;

✪ 基因表达调控与功能研究:等位基因表达分析、转录活跃状态关联;

✪ DNA损伤与修复研究

✪ 高级技术联用:使用多种不同颜色的探针组合分别标记所有染色体,清晰识别复杂的核型重排;结合流式细胞术,分选出被FISH标记的特定染色体或DNA片段,用于后续的测序分析。

 

特色服务 

 ✪ 全流程服务:服务涵盖全流程实验,高效完整; 

 ✪ 个性化方案:根据实验目的提供专属实验方案及解决方案; 

 ✪ 完整数据链:详实的试验记录、完整的原始数据及详细的技术检测报告,为您的科研保驾护航; 

 ✪ 超长的售后:1年超长售后,含样本保存及疑问解答等。

服务流程/service process

服务流程图3.png

客户提供/Customer provides

送样要求

✪  组织:新鲜或固定(10%中性甲醛、4%多聚甲醛)组织样本;

✪ 细胞:新鲜(大于106)或固定(10%中性甲醛、4%多聚甲醛)细胞样本;

✪ 切片:石蜡切片,冰冻切片以及细胞爬片,涂片;

✪ 实验信息:基因名称及ID。

注:特殊条件及样品请详询。

交付内容/Delivered content

✪ 染色后的切片;

✪ 探针序列;

✪  所有原始数据;

✪  检测实验报告。

注:以上均为常规提供,特殊要求请详询。

服务说明/Service Specification

DNA FISH.png

常见问题/Service Specification

Q: 原位杂交阴性对照正常、但实验组结果重复性差怎么解决?
A: 实验组原位杂交结果时好时坏、重复性差,多源于切片厚薄不均、固定时间批次不一、杂交孵育湿度温度不统一、探针批次差异及操作手法不标准;需统一切片厚度、标准化组织固定与脱蜡流程,固定恒温湿盒参数、统一探针批号与工作浓度,关键实验设置多张组织平行切片及生物学重复,全程操作流程规范化,保证结果稳定可重复。
Q: 探针保存容易降解,怎么存放才能长期稳定?
A: 探针易受温度、反复冻融、核酸酶污染发生降解,直接导致杂交信号减弱或实验失败;探针需分装避光保存避免反复冻融,短期 4℃冷藏、长期 - 80℃避光存放,配制和稀释全程使用无酶耗材与缓冲液,避免室温长时间放置,最大程度维持探针完整性与杂交活性。
Q: 冰冻切片原位杂交比石蜡切片更容易出问题,要注意什么?
A: 冰冻切片含水量高、组织结构松散,做原位杂交更易出现脱片、背景高、RNA 降解等问题,主要源于速冻固定不规范、未充分脱水、内源酶未灭活、孵育易干片;实验需快速速冻减少核酸降解,梯度充分脱水通透,加强内源性磷酸酶 / 过氧化物酶灭活,湿盒全程保湿孵育,降低洗涤强度避免组织破损,适配冰冻切片特性优化整套流程。
Q: 温度不好把控,温度偏差对结果影响大吗?
A: 杂交温度是决定探针与靶序列特异性结合的核心因素,温度过高会导致探针结合力下降、信号显著减弱甚至无信号,温度过低则会大幅增加非特异结合、背景杂乱升高;需根据探针长度和 GC 含量参考标准体系设定适宜杂交温度,全程使用恒温湿盒保证温度稳定,避免环境温差干扰杂交特异性。
Q: 蛋白酶 K 消化怎么把控,过消化和消化不足有什么影响?
A: 蛋白酶 K 消化是原位杂交关键步骤,消化不足会导致靶核酸被蛋白包裹无法与探针结合造成无信号,消化过度又会破坏组织结构、造成切片破碎脱落且背景升高;实操需根据组织类型梯度摸索合适浓度与孵育时间,采用低温温和消化,消化后及时终止反应,兼顾靶位点暴露与组织结构完整性。
Q: 原位杂交出现非特异杂信号、斑点杂乱怎么排除?
A: 原位杂交出现大量杂乱杂点与非特异信号,多为探针自身非特异结合、杂交体系盐离子浓度不适、洗涤条件过弱、组织残留杂质未清理以及探针降解所致;可重新优化杂交缓冲液离子配比,提高洗涤严谨度与严谨度,使用纯化后的完整探针避免降解,设置正义探针阴性对照扣除非特异斑点,精准区分真实靶标信号与杂信号。
Q: 组织切片容易脱落、漂片严重是什么原因?
A: 石蜡或冰冻切片做原位杂交时易脱落漂片,主要是载玻片未做黏附处理、固定时间不足、脱蜡水化流程过快、蛋白酶消化过度破坏组织结构;实验需提前用多聚赖氨酸或 APES 处理玻片增强黏附性,规范组织固定时长,放慢脱蜡水化梯度步骤,调低蛋白酶 K 浓度并缩短消化时间,减少组织结构损伤,避免切片脱落。
Q: 原位杂交背景很高、整片非特异着色严重如何解决?
A: 原位杂交整体背景偏高、非特异着色明显,主要是预杂交封闭不充分、探针浓度过高、洗涤严谨度不够、组织内源性酶或生物素干扰以及孵育过程干片造成;可延长预杂交封闭时间降低非特异结合,适当稀释探针工作浓度,严格按梯度温度和盐浓度进行严谨洗涤,提前做内源性酶灭活处理,全程保持湿盒保湿避免干片,能有效压低背景、提升特异信号对比度。
Q: 原位杂交完全无杂交信号,探针孵育后没有阳性显色怎么办?
A: 原位杂交无任何阳性信号,多由样本固定不当、组织过度脱蜡、探针变性不充分、杂交温度与时间不合适、蛋白酶消化不足导致靶核酸无法暴露;实验需控制 4% 多聚甲醛适度固定,保证组织彻底梯度脱蜡,探针经高温变性后再复性,严格设置适宜杂交温度并保证足够孵育时长,优化蛋白酶 K 消化浓度与时间充分暴露靶位点,同时设置阳性组织对照排查探针有效性,即可正常出现特异性杂交信号。
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