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                    凝胶迁移实验(EMSA)
凝胶迁移实验(EMSA)
验证型EMSA
竞争型EMSA
超迁移EMSA
RNA/DNA结合蛋白
服务特色
检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白、特定的蛋白质。
服务介绍
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服务说明
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常见问题

服务介绍/Introduction 

凝胶迁移或电泳迁移率检测(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)是一种检测蛋白质和DNA序列相互结合的技术,可用于定性和定量分析。目前已用于研究DNA结合蛋白和特定的DNA序列的相互作用,是转录因子研究的经典方法。


验证型EMSA

⽤于验证探针是否含有可与蛋⽩质结合的位点。将结合位点突变,以突变探针为对照,野⽣型探针出现迁移条带,⽽突变探针未出现迁移条带,则说明该探针含有可与蛋⽩质结合的位点。


竞争型EMSA

探针序列不变,不含修饰基团的探针称为冷探针。冷探针与标记探针竞争性地与蛋⽩结合,冷探针不显影出迁移条带。以冷探针为对照,标记探针出现迁移条带,⽽冷探针迁移条带减弱或消失,则排除了假阳性⼲扰,增加实验结果准确性。


超迁移EMSA

使⽤⽬标蛋⽩的特异性抗体,蛋⽩-探针复合物被抗体识别并结合,该三聚复合物在凝胶电泳中,迁移速率再次增⼤,出现在蛋⽩-探针复合物的上⽅的超迁移条带,验证了探针与⽬的蛋⽩的特异性结合

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 适用场景

验证DNA结合蛋白:确认转录因子等蛋白是否直接与特定的DNA序列结合;

✪ 确定结合序列:通过竞争实验鉴定蛋白结合DNA所需的核心序列;

✪ 计算结合亲和力:通过滴定蛋白浓度,测量蛋白与核酸相互作用的Kd值;

✪ 检测RNA结合蛋白:用于验证RNA结合蛋白与特定RNA序列的直接互作;

✪ 研究复合物形成:观察蛋白-蛋白互作对DNA结合能力的影响.

 

 特色服务 

 ✪ 全流程服务:服务涵盖全流程实验,高效完整; 

 ✪ 个性化方案:根据实验目的提供专属实验方案及解决方案; 

 ✪ 完整数据链:详实的试验记录、完整的原始数据及详细的技术检测报告,为您的科研保驾护航; 

 ✪ 超长的售后:1年超长售后,含样本保存及疑问解答等。

服务流程/service process

服务流程图3.png

客户提供/Customer provides

样本信息

✪  蛋白信息:名称+物种/登录号/序列;

✪  抗体信息:IP级抗体≥10 μL/样(超迁移EMSA),需明确物种信息、稀释比等;

✪  探针:≥1 pmol/样;

✪  重组蛋白:纯度需≥90%,含量需≥50μg/样,浓度0.2 mg/mL。


送样要求

✪  基因模板:基因片段≥ 5μL,浓度≥50 ng/μL;干冰运输;

  组织:动物组织≥0.5 g;植物组织≥2 g;新鲜取材,干冰运输;

✪  质粒:≥4 μg/样;需提供测序结果及抗性等信息;干冰运输;

✪  甘油菌:50 μL/样;保存1年以上的甘油菌需进行活化后送样;冰袋运输;

✪  细胞:≥ 1×107/样;离⼼后收细胞沉淀,沉淀体积约为80-100 μL;干冰运输;复苏细胞常温运输;

✪  探针:≥1 pmol/样;干冰运输。

注:以上送样量均为单组实验,若为多组实验,送样量均等⽐增加。特殊条件及样品请详询。

交付内容/Delivered content

✪  目的基因的质粒1 μg,测序报告;

✪  所有原始数据;

✪  检测实验报告。

注:以上均为常规提供,特殊要求请详询。

服务说明/Service Specification

MeDIP.png

在线课堂/Service Specification

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常见问题/Service Specification

Q: 分子互作结果无法重复、时有时无,怎么破?
A: 分子互作实验结果难以重复、信号时有时无,核心原因在于细胞批次与代数差异、实验操作未标准化、样本状态不稳定以及弱相互作用易受环境条件波动影响;可通过统一使用同一批次、相同代数的细胞,严格在 4℃、14000 g 条件下裂解 15 min,把控孵育时长并保持全程持续旋转,磁珠提前预洗两次,选用同一批号抗体,关键实验至少设置三次生物学重复与技术重复,以此实现实验流程标准化,保证结果稳定可重复。
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