服务介绍/Introduction
Southern Blot是一种常用的分子生物学技术，常用于检测特定DNA序列的存在、大小和相对丰度。
其原理为：在限制性内切酶作用下，genome DNA被切割成不同长度的片段，再经琼脂糖凝胶电泳按分子量大小分离。再通过电场作用，将DNA从凝胶迁移到NC膜上，进而通过探针杂交，实现对目标DNA片段的检测。
适用场景
✪ 基因突变及重排检测：比较不同样品（如给药前vs给药后、病变vs正常）中目标DNA的缺失、插入或易位；
✪ 表观遗传研究：联合甲基化敏感限制酶，分析DNA甲基化模式变化（如印迹基因或肿瘤抑制基因）；
✪ 病原体检测：检测整合到宿主基因组中的病毒DNA（如HPV、HBV）；
✪ 克隆及图谱构建：分析基因组文库中特定片段，构建限制性酶切图谱；
✪ 转基因生物鉴定：确认外源基因是否整合到宿主基因组及其拷贝数。
特色服务
✪ 提供定性与半定量分析；
✪ 适配多类型样本，如细胞、组织、血清等；
✪ 提供灰度值量化，结果更加直观；
✪ 适合复杂组分验证。
服务流程/service process
客户提供/Customer provides
样品信息
✪ 指标信息：含DNA名称、分子量大小等；
✪ 探针信息：≥10pmol/样(需明确序列、标记及使用比推荐)；
注：若需我方提供探针，请明确目标基因序列、种属及标记要求。
送样要求
✪ 细胞：1×107个细胞，离心后收集细胞沉淀；干冰运输。
✪ 组织：动物组织不少于0.5 g；植物组织不少于1 g；干冰运输。
✪ 样品：已提取的高纯度genome DNA(OD260/280=1.8~2.0) ≥ 50 μg，浓度 ≥ 100 ng/L；干冰运输。
✪ 血液样品：≥ 2 mL全血（含EDTA或肝素抗凝）；干冰运输。
交付内容/Delivered content
✪ 全部原始胶图
✪ 灰度值分析图
✪ 检测实验报告
服务说明/Service Specification
常见问题/Service
Specification
Q：
ELISA 实验标准曲线线性差、R² 值低该怎么排查？
A：
可从以下几方面逐一排查：①标准品配制，梯度稀释是否混匀；②孵育条件，温度、时间是否稳定；③洗涤步骤，是否充分去除残留；④底物显色，时间是否统一；⑤设备读数，酶标仪是否稳定。
Q：
多抗做 WB 时，条带总是有非特异性信号，该怎么优化？
A：
多抗检测容易出现非特异性背景干扰，可从多个实验环节进行优化改善：通过梯度稀释一抗筛选出最佳工作浓度，适当延长封闭时长并选用含 0.1% Tween-20 的封闭液，同时增加 TBST 洗涤次数以有效降低背景干扰；选用脱脂奶粉或 BSA 进行封闭时，需留意抗体适配性与交叉反应问题，尤其是磷酸化抗体应避免使用牛奶封闭，必要时可直接更换特异性更强的单克隆抗体，从根源减少非特异性杂信号。
Q：
WB 条带中间出现白色圆圈（白圈），该怎么解决？
A：
WB 条带出现白圈现象，大多是转膜过程中产生气泡所造成，主要是转膜组装三明治结构时胶与膜之间残留气泡，阻碍了蛋白正常转移，也可能是转膜温度过高滋生气泡或是膜活化不充分所致；实验组装时需用玻璃棒轻轻滚压彻底排尽气泡，同时采用预冷转膜缓冲液，并全程在冰浴条件下进行转膜操作即可避免该问题。
Q：
WB 条带出现 “微笑 / 皱眉” 形状，是什么问题？
A：
WB 条带出现变形多与电泳操作环节密切相关，主要原因包括凝胶配制时聚合不均匀或内部残留气泡、电泳电压过高使凝胶发热造成蛋白迁移不均，以及上样量过大或样本盐浓度偏高干扰正常迁移速率；实际实验中可通过降低电泳运行电压、保证凝胶充分完全聚合、优化样本缓冲液配比等方式，有效改善条带变形的问题。
Q：
WB 条带位置和预期分子量不符，该怎么排查？
A：
条带位置偏差的常见原因：① 蛋白存在翻译后修饰（如糖基化、磷酸化），会导致分子量偏移；② 存在转录异构体或蛋白剪切产物；③ 凝胶浓度选择不当（如小分子蛋白用高浓度胶）；④ 电泳条件不稳定，导致迁移率异常。可结合文献和阳性对照验证条带特异性。
Q：
WB 条带出现很多杂带，是什么原因？
A：
WB 实验中条带出现杂带的主要成因包括：一抗特异性较差，存在非特异性结合；一抗或二抗浓度过高，导致非特异性信号增强；封闭不彻底，膜上的非特异性位点未被有效封闭；样本中蛋白发生降解或存在非特异性杂蛋白干扰；以及电泳时上样量过大，超出了抗体的识别能力。针对这些问题，可通过梯度稀释抗体找到最佳工作浓度、优化封闭条件以减少非特异性结合、增加样本纯化步骤来去除杂质，从而有效改善杂带问题。
Q：
WB 背景很高、整片发黑，该怎么解决？
A：
WB 实验中背景信号过高通常与封闭、抗体孵育及洗涤环节相关：首先要排查封闭是否充分，可通过延长封闭时间（如延长至 2 小时）或更换封闭液改善，例如使用 BSA 替代脱脂奶粉，避免内源性磷酸酶对磷酸化抗体检测的干扰；其次可能是抗体浓度过高，可适当降低一抗与二抗的稀释比例，减少非特异性结合；此外洗涤不充分也会导致背景升高，建议增加 TBST 的洗涤次数并延长每次洗涤的时间；最后还需注意实验操作的规范性，避免用手直接接触膜，使用干净的耗材，防止膜被污染而造成背景异常。
Q：
WB 条带信号很弱，如何增强信号？
A：
可以从以下环节优化：
① 增加蛋白上样量（确认样本无降解）；
② 降低一抗稀释比例，延长 4℃孵育时间；
③ 优化转膜条件，确保蛋白高效转移；
④ 使用灵敏度更高的发光试剂；
⑤ 调整曝光时间，或改用荧光 WB 系统提升检测限。
Q：
WB 实验中完全没有条带信号，可能是什么原因？
A：
常见原因包括：
① 目的蛋白在样本中表达极低或不表达；
② 蛋白降解（未加足量蛋白酶抑制剂、反复冻融）；
③ 转膜失败（蛋白未转移到膜上或转过凝胶）；
④ 一抗 / 二抗不匹配、浓度过低或孵育时间不足；
⑤ 曝光时间过短或检测系统灵敏度不足。可通过加入阳性对照、优化转膜条件和抗体浓度排查。
