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                    RNA pull-down
RNA pull-down
高灵敏
高特异性
定量分析
适用性广
服务特色
使用特异性二抗进行检测,能有效避免抗体重链对结果的信号干扰。
服务介绍
服务流程
客户提供
交付内容
服务说明
在线课堂
常见问题

服务介绍/Introduction 

蛋白质与RNA的相互作用是许多细胞功能的核心,如蛋白质合成、mRNA组装、病毒复制、细胞发育调控等。使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过WB实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。若待检测目的蛋白明确,选择WB鉴定;若不明确,则可选择质谱鉴定。

本平台的技术能够高度特异地富集与目标RNA序列相互作用的蛋白质,具有较低的背景干扰,可对RNA-蛋白质相互作用进行定量分析,还可同时研究多个RNA-蛋白质相互作用。此外,可在体外和体内研究,适用于各种生物体系和细胞类型。

RNA pull-down试剂盒(动物)-62.jpg

 适用场景

鉴定与特定RNA结合的蛋白质:使用生物素标记的RNA探针从细胞裂解液中捕获并鉴定其相互作用的RNA结合蛋白;

 验证已知的RNA-蛋白相互作用:通过Western Blot检测特定的已知蛋白是否存在于RNA pull-down的洗脱产物中,从而验证其与该RNA的结合;

 研究非编码RNA的功能机制:以疾病或发育相关的lncRNA或circRNA为诱饵,钓取其结合的转录因子、染色质修饰复合物或信号通路蛋白,揭示其调控网络。

 

 特色服务 

 ✪ 全流程服务:服务涵盖全流程实验,高效完整; 

 ✪ 个性化方案:根据实验目的提供专属实验方案及解决方案; 

 ✪ 完整数据链:详实的试验记录、完整的原始数据及详细的技术检测报告,为您的科研保驾护航; 

 ✪ 超长的售后:1年超长售后,含样本保存及疑问解答等。

服务流程/service process

服务流程图3.png

客户提供/Customer provides

样本信息

✪  蛋白信息:名称+物种/登录号/序列;

✪  抗体信息:≥10 μL/样,需明确物种信息、稀释比等;


送样要求

✪  基因模板:RNA片段≥ 5μL,浓度≥50 ng/μL;干冰运输;

  组织:动物组织≥0.5 g;植物组织≥1 g;新鲜取材,干冰运输;

✪  质粒:≥4 μg/样;需提供测序结果及抗性等信息;干冰运输;

✪  甘油菌:50 μL/样;保存1年以上的甘油菌需进行活化后送样;冰袋运输;

✪  细胞:≥ 3×107/样;离⼼后收细胞沉淀,沉淀体积约为80-100 μL;干冰运输;复苏细胞常温运输。

注:特殊条件及样品请详询。

交付内容/Delivered content

✪  目的基因的质粒1 μg,测序报告;

  • ✪  SDS-PAGE银染图;

✪  所有原始数据;

✪  检测实验报告。

注:以上均为常规提供,特殊要求请详询。

服务说明/Service Specification

RNA pull down.png

在线课堂/Service Specification

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常见问题/Service Specification

Q: 分子互作结果无法重复、时有时无,怎么破?
A: 分子互作实验结果难以重复、信号时有时无,核心原因在于细胞批次与代数差异、实验操作未标准化、样本状态不稳定以及弱相互作用易受环境条件波动影响;可通过统一使用同一批次、相同代数的细胞,严格在 4℃、14000 g 条件下裂解 15 min,把控孵育时长并保持全程持续旋转,磁珠提前预洗两次,选用同一批号抗体,关键实验至少设置三次生物学重复与技术重复,以此实现实验流程标准化,保证结果稳定可重复。
Q: RNA–蛋白互作(RNA pull-down)无特异条带、RNA 降解严重?
A: RNA pull-down 实验常出现无特异性条带、RNA 易降解等问题,主要是 RNase 污染、RNA 二级结构干扰蛋白结合以及孵育条件设置不当所导致;实验需全程保持 RNase-free 环境并使用无酶耗材,将 RNA 置于 65℃变性 5 分钟后自然复性以优化二级结构,选用含镁离子的缓冲液体系,在 4℃条件下孵育 4–6 小时保证充分结合,同时设置反义 RNA 或无关 RNA 作为阴性对照,即可有效排除干扰、提升实验可靠性。
Q: 贵公司RNA pulldown试剂盒是否包含探针呢?
A: 对于贴壁细胞,采用转染试剂转染即可;对于比较难转染的细胞,为提高转染效率,可选购特殊要求的转染试剂或者使用电转的方法,但是由于电转的方法对细胞损伤比较大,该方法未必是最佳的;转染效率的确定,常用的是使用荧光标记的siRNA,通过荧光显微镜,共聚焦显微镜,流式细胞仪检测等方法,但最终以达到基因过表达或者干扰的效率为准。
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