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                    免疫共沉淀(Co-IP-WB/MS)
免疫共沉淀(Co-IP-WB/MS)
蛋白质复合物鉴定
蛋白质相互作用
信号传导研究
疾病机制解析
服务特色
Co-IP技术是研究蛋白质相互作用的重要方法之一,通过对蛋白质复合物的免疫沉淀和分析,可以揭示蛋白质相互作用的组成和功能,为理解生物过程和疾病机制提供重要的信息。
服务介绍
服务流程
客户提供
交付内容
服务说明
常见问题

服务介绍/Introduction

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种研究两个蛋白在体内是否存在蛋白相互作用(Protein-Protein Interaction, PPI)的技术手段,是生命科学研究中验证PPI的金标准,在互作研究中不可或缺。其可用于验证蛋白-蛋白互作、分析鉴定互作蛋白、研究不同修饰或某蛋白表达量或功能结构域对蛋白互作的调控作用、药靶筛选和疗效评估。

其核心原理基于免疫学中“抗原-抗体”间可特异性免疫结合,通过特异性抗体捕获复杂细胞提取物中的靶蛋白,从而捕获其结合蛋白,进而通过Western blot验证判断二者是否存在相互作用,或通过质谱鉴定与靶蛋白结合的复杂组分。

通用IPCo-IP试剂盒(动物)-23.jpg


适用场景

验证蛋白-蛋白互作:免疫沉淀靶蛋白,通过Western blot验证其与预期结合蛋白的PPI;

分析鉴定互作蛋白:免疫沉淀靶蛋白,使用质谱技术分析鉴定与其结合的蛋白复合物中的各组分;

研究不同修饰或某蛋白表达量或功能结构域对蛋白互作的调控作用:对经过翻译后修饰的靶蛋白进行过表达、敲低、功能域截短,再进行免疫沉淀,通过Western blot或质谱技术,分析修饰或功能结构域对其与结合蛋白互作的调控作用;

✪ 药靶筛选和疗效评估:靶向参与疾病通路的特定蛋白质来筛选潜在药物靶标。


特色服务

 全流程服务:服务涵盖质粒构建、细胞培养及转染、IP前检测等Co-IP全流程,高效完整;

个性化方案:根据实验目的提供专属实验方案及解决方案;

完整数据链:详实的试验记录、完整的原始数据及详细的技术检测报告,为您的科研保驾护航;

超长的售后:1年超长售后,含样本保存及疑问解答等。


服务流程/service process

服务流程图3.png

客户提供/Customer provides

样品信息

I. 内源性Co-IP

✪ 诱饵蛋白信息:名称+物种/登录号/序列/大小等;

✪ Co-IP抗体:IP级抗体(≥10 μg/样);WB:≥10 μL/抗体;


II. 外源性Co-IP

✪ 诱饵蛋白信息:名称+物种/登录号/序列/大小等;

✪ 基因模板:基因片段≥50ng;菌液≥10μL;

✪ Co-IP抗体:IP级抗体(≥10μg/样);WB:≥10μL/抗体。

注:若需我方提供抗体,请明确目标蛋白名称、种属等基本信息。


送样要求

✪  细胞:1×107细胞,离心后收集细胞沉淀,干冰运输;

组织:≥0.5 g,离体后液氮速冻并-80 ℃冻存,干冰运输;

抗体及基因模板密封,干冰寄送。

注:特殊条件及样品请详询。


交付内容/Delivered content

I. 内源性Co-IP

✪ 所有原始数据

✪ 灰度值分析图;

质谱鉴定报告

✪ 检测实验报告。


II. 外源性Co-IP

表达质粒1 μg

✪ 所有原始数据;

✪ 灰度值分析图;

✪ 质谱鉴定报告;

✪ 检测实验报告。

注:以上均为常规提供,特殊要求请详询。

服务说明/Service Specification

Co-IP.jpg

常见问题/Service Specification

Q: ELISA 实验标准曲线线性差、R² 值低该怎么排查?
A: 可从以下几方面逐一排查:①标准品配制,梯度稀释是否混匀;②孵育条件,温度、时间是否稳定;③洗涤步骤,是否充分去除残留;④底物显色,时间是否统一;⑤设备读数,酶标仪是否稳定。
Q: 分子互作结果无法重复、时有时无,怎么破?
A: 分子互作实验结果难以重复、信号时有时无,核心原因在于细胞批次与代数差异、实验操作未标准化、样本状态不稳定以及弱相互作用易受环境条件波动影响;可通过统一使用同一批次、相同代数的细胞,严格在 4℃、14000 g 条件下裂解 15 min,把控孵育时长并保持全程持续旋转,磁珠提前预洗两次,选用同一批号抗体,关键实验至少设置三次生物学重复与技术重复,以此实现实验流程标准化,保证结果稳定可重复。
Q: 膜蛋白互作用 Co-IP 总不稳定、信号反复?
A: 难点:膜蛋白疏水性强、构象依赖脂质环境、易聚集。解决:用纳米盘(Nanodisc)重构膜蛋白、裂解用0.05–0.1% 温和去垢剂(DDM)、避免反复冻融、优先 邻近标记(BioID/APEX2)捕捉弱 / 瞬时膜互作。
Q: Co-IP 跑 WB 时IgG 重链 / 轻链干扰(50 kDa / 25 kDa),盖过目标条带怎么办?
A: 主要问题是IP 抗体与二抗交叉反应、抗体用量过大。要换不同物种 IP 抗体 + 对应二抗、用共价偶联珠子、IP 后用甘氨酸 pH 2.8 洗脱再 WB、用轻链特异性二抗。
Q: Co-IP 背景很高、杂带多,怎么压背景?
A: 主要是珠子非特异吸附、洗涤不够、蛋白浓度过高、抗体过多。beads预封闭(5% BSA,1 h)、洗涤5–7 次并逐步提高盐浓度(300–500 mM NaCl)、减少上样量、抗体梯度稀释、做pre-clearing去除非特异复合体。
Q: Co-IP 老是无条带 / 假阴性,怎么回事?
A: 常见原因:互作太弱 / 瞬时、裂解液太强把复合物打散、抗体亲和力低、蛋白降解、表位被遮挡。用温和裂解液(0.1–0.5% NP-40)、全程4℃+ 足量抑制剂、弱互作可轻度交联(0.1–0.5% 甲醛或 DSS)、优先IP 级单抗,上样量控制在500–1000 μg。
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