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                    APEX2
APEX2
适用性广
高时空分辨率
兼容多种细胞区室
服务特色
APEX 标记速度快、空间分辨率高,可在 1 分钟内完成邻近蛋白的生物素化,极大地降低了细胞状态变化对实验结果的干扰。
服务介绍
服务流程
客户提供
交付内容
服务说明
在线课堂
常见问题

服务介绍/Introduction 

APEX2邻近标记技术的核心原理基于工程化的辣根过氧化物酶突变体,通过在活细胞内实现时空精确的蛋白质标记,犹如在细胞内安装了一个"精确制导"系统,能够捕捉蛋白质的瞬时相互作用。

APEX2(增强型辣根过氧化物酶)技术源于APEX,是一种基于工程化辣根过氧化物酶的邻近标记技术。它的发展可追溯到2015年,由Alice Ting实验室在APEX基础上通过定向进化优化而来。APEX2相比前身具有更高的催化活性和稳定性,能够在活细胞中进行实时、高分辨率的蛋白质标记。

06.APEX2 -原理.jpg

06.APEX2-流程.jpg

 适用场景

亚细胞定位分析:将APEX靶向到特定细胞器,可高时空分辨率地解析该区域的蛋白质组组成;

✪ 动态蛋白互作分析:通过控制标记时间,可捕捉特定信号刺激下瞬时或动态的蛋白相互作用变化;

✪ 蛋白质-RNA相互作用:结合APEX与RNA测序(APEX-RIP),可鉴定特定亚细胞区域内与蛋白质相互作用的RNA分子;

✪ 活细胞邻近标记:APEX可在活细胞中通过添加生物素酚和过氧化氢快速启动标记,适用于研究快速发生的生理过程;

✪ 蛋白质组图谱:用于绘制细胞器接触位点的蛋白质组,揭示这些功能性界面的分子组成;

✪ 药物靶点鉴定:标记药物分子结合靶点附近的蛋白质,帮助解析药物的作用机制和潜在脱靶效应。

 

 特色服务 

 ✪ 全流程服务:服务涵盖全流程实验,高效完整; 

 ✪ 个性化方案:根据实验目的提供专属实验方案及解决方案; 

 ✪ 完整数据链:详实的试验记录、完整的原始数据及详细的技术检测报告,为您的科研保驾护航; 

 ✪ 超长的售后:1年超长售后,含样本保存及疑问解答等。

服务流程/service process

服务流程图3.png

客户提供/Customer provides

样本信息

✪  蛋白信息:名称+物种/登录号/序列;

✪  抗体信息:≥10 μL/样,需明确物种信息、稀释比等;


送样要求

✪  基因模板:基因片段≥ 5μL,浓度≥50 ng/μL;干冰运输;

  组织:动物组织≥0.5 g;植物组织≥1 g;新鲜取材,干冰运输;

✪  质粒:≥4 μg/样;需提供测序结果及抗性等信息;干冰运输;

✪  甘油菌:50 μL/样;保存1年以上的甘油菌需进行活化后送样;冰袋运输;

✪  细胞:≥ 1×107/样;离⼼后收细胞沉淀,沉淀体积约为80-100 μL;干冰运输;复苏细胞常温运输;

注:特殊条件及样品请详询。

交付内容/Delivered content

✪  目的基因的质粒1 μg,测序报告;

  • ✪  SDS-PAGE银染图;

✪  所有原始数据;

✪  检测实验报告。

注:以上均为常规提供,特殊要求请详询。

服务说明/Service Specification

APEX2.png

在线课堂/Service Specification

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常见问题/Service Specification

Q: 邻近标记(BioID/APEX)背景高、标记效率低、假阳性多?
A: 邻近标记实验出现背景偏高、标记效率低且假阳性偏多的问题,主要源于标记时间过长、生物素使用浓度过高、裂解后发生非特异性生物素化修饰以及标记酶活性不足等因素;可分别将 BioID 标记时间控制在 4℃条件下 10–30 min,APEX 采用 1 min 快速标记模式,生物素工作浓度调整为 50–100 μM,样品裂解后利用链霉亲和素磁珠进行严格洗涤,同时设置生物素阴性对照来有效排除背景污染与假阳性干扰。
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