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                    荧光素酶蛋白互补实验(LCA)
荧光素酶蛋白互补实验(LCA)
低背景
高灵敏
实时监测
非侵入性
服务特色
相较于其它蛋白质互作研究技术, 荧光素酶蛋白互补实验(LCA)借助烟草瞬时表达系统,具有简单、灵敏、可靠、高效和低背景等优点, 并可轻松扩展为大规模蛋白质互作的筛选和验证研究。
服务介绍
服务流程
客户提供
交付内容
服务说明
常见问题

服务介绍/Introduction 

荧光素酶蛋白互补实验(Luciferase Complementation Assay,LCA)用于判断两个蛋白是否能够互作,将荧光素酶蛋白的两个片段分别连接到两个不同的待测蛋白上,若两个蛋白能够结合,则荧光素酶蛋白得以补全酶解底物发出荧光。具有高灵敏度、实时监测、非侵入性检测、动态范围宽等优势。

LCA.jpg

 适用场景

蛋白互作验证通过分裂荧光素酶片段在蛋白结合时重建发光,高通量、定量验证已知互作或筛选库中的互作蛋白;

✪ 高通量药物筛选:通过检测药物处理后的相对光单位变化,快速、灵敏地筛选能促进或抑制特定蛋白-蛋白相互作用的小分子化合物;

✪ 定量与动态分析:通过实时检测酶催化产生的光信号,对蛋白质相互作用的强度、亲和力和细胞内的动态变化进行相对定量;

✪ 复合物组装研究:利用多色或拆分位点不同的荧光素酶,研究同一复合体中多个亚基之间的有序组装过程;

✪ 弱或瞬时互作研究:基于酶催化的信号放大效应,检测那些微弱、短暂或在传统方法中难以捕捉的蛋白质相互作用。

 

 特色服务 

 ✪ 全流程服务:服务涵盖质粒构建及提取、实验前检测、互作成像分析等全流程实验,高效完整; 

 ✪ 个性化方案:根据实验目的提供专属实验方案及解决方案; 

 ✪ 完整数据链:详实的试验记录、完整的原始数据及详细的技术检测报告,为您的科研保驾护航; 

 ✪ 超长的售后:1年超长售后,含样本保存及疑问解答等。

服务流程/service process

服务流程图3.png

客户提供/Customer provides

样品信息

目的蛋白信息:名称+物种/登录号/序列/大小等;

质粒:抗体≥2 μg/样;

克隆模板:≥5μL,浓度≥100 ng/μL;

注:若需我方构建质粒,请明确目标蛋白名称、种属等基本信息。


送样要求

✪  质粒≥2 μg/样;冰袋运输;

✪  菌液:菌液量应≥0.5 mL,放置⼀年以上的⽢油菌需活化后送样;低温运输;

✪  克隆模板≥5μL,浓度≥100 ng/μL;需含测序报告;干冰运输;

注:特殊条件及样品请详询。

交付内容/Delivered content

✪ 表达质粒1 μg;

✪ 所有原始数据;

✪ 互作成像分析;

✪ 检测实验报告。

注:以上均为常规提供,特殊要求请详询。

服务说明/Service Specification

LCA.jpg

常见问题/Service Specification

Q: 分子互作结果无法重复、时有时无,怎么破?
A: 分子互作实验结果难以重复、信号时有时无,核心原因在于细胞批次与代数差异、实验操作未标准化、样本状态不稳定以及弱相互作用易受环境条件波动影响;可通过统一使用同一批次、相同代数的细胞,严格在 4℃、14000 g 条件下裂解 15 min,把控孵育时长并保持全程持续旋转,磁珠提前预洗两次,选用同一批号抗体,关键实验至少设置三次生物学重复与技术重复,以此实现实验流程标准化,保证结果稳定可重复。
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