实验原理/Experimental principle
抗体与抗原之间的结合依赖疏水作用、氢键、静电引力及构象互补等非共价相互作用。本剥离液通过配方中的特定试剂(如去垢剂、温和还原剂及缓冲盐)协同作用,在不完全变性抗原蛋白的前提下,破坏抗体-抗原复合物的空间构象和分子间作用力,使抗体从膜上解离下来。由于配方温和,剥离过程中不会去除或显著损伤已固定在膜上的靶蛋白,因此剥离后的膜可保持抗原活性,能够重新进行封闭和下一轮抗体孵育。通常在室温下孵育15分钟即可完成剥离,同一张膜可进行2-5次甚至更多次的反复检测。
技术流程/Procedure
1. 完成ECL发光检测后,用TBST洗膜 5 min;
2. 加入适量本产品覆盖膜表面(以膜可轻轻上浮为宜),在摇床上漂洗15 min;
注意:剥离时间视膜上抗体结合量的多少而定,如抗体结合较强或结合时间较长,可适当延长剥离时间至20~30 min。
3. 倒掉剥离液,加入 TBST漂洗膜 5 min。此时可在膜上滴上ECL发光液以快速检验抗体剥离效果;用合适的封闭液重新封闭膜,即可再次杂交其它抗体;
4. 使用本剥离液,膜可进行至少5次以上剥离而不会显著影响信号强度。
产品优势/Highlights
✪ 高效省时
不需重新制胶电泳,同一张膜的相同样品可用于多种检测;仅需15~20 min即可完成剥离;
✪ 配方温和
对转印膜上结合的靶蛋白损伤极其微小;
✪ 环保无毒
本品使用环保配方,无毒,无刺激性气味。