实验原理/Experimental principle
本试剂盒基于辣根过氧化物酶(HRP)催化的增强化学发光反应原理。在Western blot检测中,目标蛋白被特异性一抗识别,随后与HRP标记的二抗结合。当加入本试剂盒提供的化学发光底物时,HRP催化底物氧化并产生不稳定的中间体,该中间体迅速分解并释放光子(波长约425 nm)。本产品采用优化的增强剂配方,使HRP的催化效率显著提升,发光信号强度较普通ECL试剂盒增强数十倍,检测下限可达飞克(fg)级别。
技术流程/Procedure
1. 润膜:洗涤结束后保持膜湿润,沥去残液;
2. 配液:按 0.1 mL/cm² 取 A液与B液等体积混匀,现配现用;
注意:通常一张膜6×8cm的PVDF膜需发光液5mL。
3. 孵育:将工作液均匀覆盖膜面,置摇床轻晃 1–2 min,避免局部底物耗竭;
注意:将膜浸泡至发光液中效果更佳。
4. 成像: X 光片—暗室压片数秒至数分钟,显影后按需决定二次曝光时间;
CCD—把膜平铺于透明护片内,按仪器指引捕获图像。
5. 再生:曝光结束可使用抗体剥离液洗脱抗体,多次重复杂交,膜性能依旧稳定。
产品优势/Highlights
✪高灵敏度
可检测低至飞克级的浓度信号,提升实验准确性;
✪ 高性价比
性能优越,价格合理,降低实验成本;
✪长效发光
发光信号持久稳定,便于长时间观察和重复检测。