实验原理/Experimental principle
本染液基于考马斯亮蓝G-250与蛋白特异性结合的原理。考马斯亮蓝G-250染料分子在酸性条件下与蛋白质中的碱性氨基酸(如精氨酸、赖氨酸)及疏水区域结合,形成稳定的染料-蛋白复合物。结合后染料的最大吸收波长由465 nm(游离态)转移至595 nm(结合态),呈现蓝色。本产品采用优化的低背景配方,在染色过程中未结合的游离染料不会产生明显背景,因此无需脱色步骤。与传统R-250染色不同,G-250对背景染色极低,染色后可直接观察蛋白条带,大幅缩短实验时间,灵敏度可达50-100 ng/条带。
技术流程/Procedure
1. 电泳结束后,将凝胶置于加热后的纯水中漂洗约5 min去除杂质,以降低背景;
2. 弃去纯水,加入适量本品 (以覆盖凝胶为宜),室温下于水平摇床上染色 10-15 min。染色结束后,弃去染色液,加入纯水洗涤去除残留染液,即可观察结果;
注意:如蛋白量较低,可适当延长染色时间,实际染色时间可根据条带显现程度决定。如需进一步降低染色背景,可每隔 20 min更换纯水进行漂洗,重复 2-3 次即可得到背景极低的凝胶。此外,如将染色后的凝胶在纯水中浸泡过夜,可以达到更好的去背景效果,从而获得更清晰的蛋白条带。
产品优势/Highlights
✪灵敏快速
仅需染色10 min即可观察低至纳克级的蛋白条带,适当延长染色时间可进一步提高灵敏度;
✪ 降低背景
染色结束后即可观察到清晰的蛋白条带,背景极低,使用纯水洗涤即可进一步降低背景染色,提高信噪比;
✪环保无毒
本品使用环保配方,无毒,无刺激性气味,无需使用含甲醇的脱色液,保护实验人员健康。