实验原理/Experimental principle
SDS裂解液基于强离子型去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)的强烈去污作用,通过SDS分子携带的疏水尾部插入细胞膜及细胞器膜脂双层、亲水头部破坏蛋白-脂质及蛋白-蛋白相互作用,从而迅速瓦解膜结构并溶解变性膜蛋白、核蛋白及胞浆蛋白;同时SDS带负电荷的疏水尾部能够包裹变性后的蛋白多肽链,赋予其均一的荷质比,使蛋白在SDS-PAGE电泳中仅按分子量大小分离。
技术流程/Procedure
一、样本准备
全血样本:采集新鲜抗凝全血(EDTA、肝素或枸橼酸钠抗凝均可),如为4°C保存样本,需恢复至室温后再进行裂解。
组织样本(骨髓、脾脏等):将组织剪碎后使用研磨器或注射器芯轻柔研磨,通过70 μm细胞筛过滤,用PBS重悬制备单细胞悬液。
二、裂解操作
按1:10比例将样本与红细胞裂解液混合(例如100 μL全血加入1 mL裂解液,或1×10⁷个细胞沉淀加入1 mL裂解液);轻轻吹打或颠倒混匀,确保样本与裂解液充分接触;室温裂解5-10分钟,期间可轻柔颠倒混匀1-2次。
(注意:裂解时间不宜超过15分钟,否则可能损伤有核细胞。)
三、离心收集有核细胞
将裂解产物转移至离心管中,4°C、400-500 × g离心5-10分钟;离心后可见白色或淡粉色沉淀(有核细胞),上清为裂解释放的血红蛋白溶液;小心弃去上清,注意不要吸走沉淀。
四、洗涤(可选,推荐)
加入1 mL预冷PBS或培养基重悬沉淀;4°C、400-500 × g离心5分钟,弃上清;重复洗涤1-2次,以彻底去除残留的血红蛋白和裂解液成分。
产品优势/Highlights
✪ 高效去除
优先裂解红细胞膜,彻底去除红细胞干扰,有效富集白细胞、有核细胞及病原体;
✪ 使用便捷
产品自带蛋白酶抑制剂PMSF,按比例混匀即可使用;
✪ 兼容性强
缓冲体系兼容Western blot、BCA/Bradford定量等实验。