实验原理/Experimental principle
外泌体专用裂解液采用优化的去污剂组合(含适量非离子型去污剂及两性离子型去污剂),通过去污剂分子插入外泌体脂双层膜结构,有效破坏由脂筏、胆固醇及多种膜蛋白组成的外泌体膜完整性,从而释放外泌体内部蛋白、膜蛋白及腔内蛋白。与常规RIPA裂解液相比,本产品针对外泌体粒径小、膜结构致密的特点进行了配方优化,能够更高效地裂解外泌体并保留蛋白的免疫原性。
技术流程/Procedure
一、样本准备
取分离纯化后的外泌体样本(沉淀形式),小心吸去上清,保留外泌体沉淀。如外泌体保存在PBS或缓冲液中,需离心收集沉淀:4°C、100,000 × g离心70分钟,或根据分离方法选择合适离心条件,弃上清。
二、裂解液准备
将外泌体专用裂解液从-20°C取出,冰上解冻。(需临用前添加蛋白酶抑制剂)。
三、裂解操作
根据外泌体沉淀量加入适量裂解液:
一般推荐:每10⁹个外泌体加入50-100 μL裂解液。若外泌体量极少(如血清样本),建议加入20-50 μL裂解液以提高蛋白浓度。用移液器轻轻吹打或涡旋振荡,使外泌体沉淀充分重悬于裂解液中。冰上裂解20-30分钟,期间可每5-10分钟轻轻振荡一次,促进裂解。
四、离心收集蛋白
将裂解产物转移至预冷离心管中,4°C、12,000-14,000 × g离心15-20分钟。离心后沉淀为未裂解的外泌体碎片及不溶性成分,上清为外泌体总蛋白提取液。小心吸取上清,转移至新的预冷EP管中,避免触及沉淀。
五、定量与保存
使用Bradford 蛋白定量试剂盒或BCA蛋白定量试剂盒(货号:BQK001/BQK003)测定蛋白浓度。分装后置于-20°C或-80°C保存,避免反复冻融。
产品优势/Highlights
✪ 高效裂解
专为外泌体设计,有效破坏外泌体脂质双分子层结构,充分释放内部蛋白质、RNA等内容物;
✪ 使用便捷
产品自带蛋白酶抑制剂PMSF,按比例混匀即可使用;
✪ 兼容性强
缓冲体系兼容Western blot、IP、BCA/Bradford定量等实验。