本裂解液基于非离子型去污剂（如Triton X-100或NP-40）的温和裂解作用，通过去污剂分子插入细胞膜脂双层破坏膜结构完整性，选择性释放胞浆及膜结合蛋白，同时由于不含SDS、脱氧胆酸钠等强离子型去污剂且对核膜破坏作用较弱，能够有效保留蛋白的天然构象及蛋白-蛋白相互作用；裂解液中预混的多种蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂协同作用，可全面抑制内源性及外源性蛋白酶和磷酸酶的活性，防止目标蛋白降解及去磷酸化。

一、样本准备

细胞样本：弃去培养液，用预冷PBS洗涤2-3次。

组织样本：剪取适量组织块（约50–100 mg），用预冷PBS洗涤2-3次。

二、裂解液准备

根据实验需求选择合适强度的RIPA裂解液（强/中/弱）。使用前加入蛋白酶抑制剂（如PMSF，终浓度1 mM），混匀备用。

三、 裂解操作

细胞：每1×10⁶个细胞加入150–250 μL RIPA裂解液，冰上吹打混匀。

组织：加入5–10倍体积RIPA裂解液，使用匀浆器或超声破碎仪充分匀浆，4°C裂解30分钟。

四、离心收集

4°C，12,000–14,000 × g 离心15分钟。取上清（即总蛋白提取液）转移至新预冷EP管中。

五、 定量与保存

使用BCA蛋白定量试剂盒（货号：BQK003）测定蛋白浓度。分装后于-20°C或-80°C保存，避免反复冻融。