本产品基于溶菌酶与非离子型去污剂的协同裂解作用：溶菌酶可特异性水解细菌细胞壁肽聚糖中的β-1,4糖苷键，破坏细胞壁的网状结构，使细胞壁通透性增加；非离子型去污剂进一步作用于细胞膜，插入脂双层破坏膜完整性，释放胞浆蛋白及可溶性膜蛋白。两者协同作用可有效裂解革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌。裂解产物经离心去除细胞碎片后获得的上清，即为保持天然活性的细菌可溶性蛋白提取液，可直接用于酶活性检测、亲和纯化、Pull-down及EMSA等下游实验。

一、菌液准备

将过夜培养的菌液按1:100比例接种至新鲜培养基中，37°C振荡培养至对数生长期（OD₆₀₀ ≈ 0.6-0.8）。收集菌液，4°C、4,000-5,000 × g离心10分钟，弃上清。用预冷PBS或缓冲液洗涤菌体沉淀1-2次，4°C、4,000-5,000 × g离心10分钟，弃上清。

二、裂解液准备

将抽提试剂从-20°C取出，冰上解冻，临用前添加蛋白酶抑制剂。若产品中溶菌酶为单独组分，需在使用前加入裂解液中至工作浓度。

三、裂解操作

每克湿重菌体沉淀加入5-10 mL抽提试剂，或每1 g菌体加入3-5 mL抽提试剂，轻轻吹打重悬菌体。冰上孵育20-30分钟，期间可每5-10分钟轻轻颠倒混匀一次。对于难裂解的革兰氏阳性菌，可适当延长孵育时间至45-60分钟，或加入溶菌酶至终浓度1 mg/mL。

四、辅助裂解（可选）

如裂解不充分，可采用以下辅助方法：

超声破碎：冰浴条件下，超声3-5次（每次10-15秒，间隔30秒），功率不宜过高。

冻融法：将菌体悬液置于-80°C冷冻后室温解冻，重复2-3次。

五、离心收集蛋白

将裂解产物转移至预冷离心管中，4°C、12,000-14,000 × g离心15-20分钟。离心后沉淀为未裂解菌体及细胞碎片，上清为活性蛋白提取液。小心吸取上清，转移至新的预冷EP管中，避免触及沉淀。

六、定量与保存

使用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度（不建议使用Bradford法，去污剂会干扰显色）。分装后置于-20°C或-80°C保存，避免反复冻融。