实验原理/Experimental principle
本产品基于离心柱技术与优化裂解液的协同作用:专用裂解液中含有高效去污剂组合(含非离子型及两性离子型去污剂),能够快速破坏细胞膜、细胞器膜及组织基质结构,释放细胞内的总蛋白;裂解完成后,将裂解产物转移至离心柱中离心,离心柱内的特殊滤膜或树脂能够选择性结合蛋白或允许蛋白通过,同时有效截留基因组DNA、细胞碎片、多糖、色素等杂质,一步离心即可实现蛋白与干扰物的分离。提取的蛋白样品建议使用BCA蛋白定量试剂盒进行浓度测定。
技术流程/Procedure
一、样本准备
细胞样本:弃去培养液,用预冷PBS洗涤细胞1-2次,收集细胞沉淀。
组织样本:取新鲜或冻存组织(10-30 mg),剪成细小碎片,用预冷PBS洗净血污。
二、裂解液准备
将裂解液从-20°C取出,冰上解冻。如产品未预混蛋白酶抑制剂,临用前添加PMSF至终浓度1 mM。
三、裂解操作
细胞样本:每1×10⁶个细胞加入100-200 μL裂解液,轻轻吹打混匀。
组织样本:每10 mg组织加入100-200 μL裂解液,使用匀浆器或研磨棒充分匀浆。
冰上裂解5-10分钟,期间可轻轻振荡2-3次。
四、柱式过滤
将离心柱放入收集管中,将裂解产物全部转移至离心柱内。室温或4°C、12,000-14,000 × g离心1-2分钟。离心后收集管中的液体即为总蛋白提取液,离心柱内截留DNA及细胞碎片。
五、定量与保存
使用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。分装后置于-20°C或-80°C保存,避免反复冻融。
产品优势/Highlights
✪ 柱式纯化,无需离心
采用离心柱设计,无需超速离心步骤,有效去除细胞碎片与核酸杂质,获得高纯度总蛋白;
✪ 快速简便
从样本到蛋白产物仅需10-15分钟,操作流程标准化,减少人为误差,适合高通量样本处理;
✪ 兼容性强
抽提产物不含干扰物质,可直接用于Western blot、BCA定量、酶活性检测及质谱分析等下游实验。