实验原理/Experimental principle
本试剂盒基于HRP标记的抗体直接检测和增强化学发光(ECL)原理。内参蛋白(如Actin、GAPDH、Tubulin)是一种由看家基因编码的组成性表达蛋白,在真核细胞中高丰度存在,其表达水平在各种生理和病理条件下相对稳定,因此被广泛用作Western Blot实验中的内参,用于校正上样误差和实验体系偏差。试剂盒中的Anti-内参-HRP抗体能特异性地识别目标内参蛋白,并与之结合。
技术流程/Procedure
1.封闭:转膜完成后,加入封闭液,室温摇床封闭5分钟;
2.抗体孵育:弃去封闭液,加入稀释好的内参抗体,室温摇床孵育30-45分钟;
3.洗涤:弃去抗体液,加入Western洗涤液,室温摇床洗涤30秒(重复3次);
4.检测:配制ECL工作液(A液:B液=1:1),覆盖印迹膜孵育0.5分钟,进行化学发光成像。
产品优势/Highlights
✪超快速检测
从完成转膜的印迹膜到获得蛋白条带仅需1小时内,大幅缩短实验周期;
✪ 操作简便
采用HRP直接偶联的内参抗体,无需二抗孵育和洗涤步骤,简化操作流程;
✪灵敏度高
使用高灵敏度的化学发光试剂,检测灵敏度高,可检测低至纳克级别的蛋白。