实验原理/Experimental principle

RIPA裂解液（Radio Immunoprecipitation Assay Lysis Buffer）通过离子型去污剂（如SDS、脱氧胆酸钠）与非离子型去污剂（如Triton X-100）的协同作用，破坏细胞膜及细胞器膜结构，同时配合蛋白酶抑制剂防止蛋白降解，在缓冲盐体系维持稳定pH及离子强度的条件下，高效释放细胞内可溶性蛋白、膜结合蛋白及核蛋白；裂解产物经离心去除不溶性碎片后获得的总蛋白提取液可直接用于Western Blot、IP、ELISA等下游实验。

技术流程/Procedure

一、样本准备

细胞样本：弃去培养液，用预冷PBS洗涤2-3次。

组织样本：剪取适量组织块（约50–100 mg），用预冷PBS洗涤2-3次。

二、裂解液准备

根据实验需求选择合适强度的RIPA裂解液（强/中/弱）。使用前加入蛋白酶抑制剂（如PMSF，终浓度1 mM），混匀备用。

三、 裂解操作

细胞：每1×10⁶个细胞加入150–250 μL RIPA裂解液，冰上吹打混匀。

组织：加入5–10倍体积RIPA裂解液，使用匀浆器或超声破碎仪充分匀浆，4°C裂解30分钟。

四、离心收集

4°C，12,000–14,000 × g 离心15分钟。取上清（即总蛋白提取液）转移至新预冷EP管中。

五、 定量与保存

使用Bradford 蛋白定量试剂盒或BCA蛋白定量试剂盒（货号：BQK001/BQK003）测定蛋白浓度。分装后于-20°C或-80°C保存，避免反复冻融。