实验原理/Experimental principle
本染色液基于Bradford法蛋白定量原理。考马斯亮蓝G-250（Coomassie Brilliant Blue G-250）染料在酸性条件下以两种形式存在：游离态（阳离子型）和结合态。当G-250与蛋白质中的碱性氨基酸（如精氨酸、赖氨酸）及芳香族氨基酸残基结合后，形成稳定的染料-蛋白复合物，使染料的最大吸收波长由游离态的465 nm（棕红色）转移至结合态的595 nm（蓝色）。在595 nm波长下，吸光度与样品中的蛋白浓度在一定范围内呈线性关系。本产品采用优化的磷酸-甲醇-染料配方，反应快速（2-5分钟即可完成），显色稳定（30分钟内读数稳定），适用于微孔板或比色皿检测，是蛋白定量中最常用的方法之一。
技术流程/Procedure
以微孔板酶标仪法为例：
1. 用PBS将待测蛋白样品进行适当稀释，可多做几个梯度（如2、4、8倍）；
2. 制备梯度系列浓度BSA标准品，建议浓度：0、125、250、500、750、1000、1500、2000 μg/mL。
2. 定量检测：
a. 加样：将各标准品及样品以5 μL/孔加至96孔板中；
注意：需设置空白对照，该孔添加5 μL稀释液。
b. 显色：每孔加入250 μL Bradford染色液，充分混匀。盖上板盖，室温静置孵育5 min， 即可检测；
c. 读值：酶标仪读取波长595 nm处光吸收值。
3. 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度：
a. 以最小二乘法绘制标准曲线（应舍弃明显离群的数值），线性方程的R² ≥ 0.99时方可使用该方程计算蛋白质含量；
b. 将样品吸光度代入线性方程，得稀释后蛋白浓度，最后乘以稀释倍数，得原始蛋白浓度。
产品优势/Highlights
✪ 极速检测
仅需5 μL样本，3~5 min显色，10 min内即可完成 96 孔板整板读数；
✪ 兼容性强
兼容金属离子、还原剂、螯合剂及去污剂。细胞裂解液、组织匀浆、分泌蛋白等生物样品均适用。
