实验原理/Experimental principle
本试剂盒基于Bradford法，核心原理为考马斯亮蓝G250（Coomassie Brilliant Blue G250）与蛋白质的选择性结合。
在酸性环境（磷酸和乙醇体系）中，游离的考马斯亮蓝G250以阳离子形式存在，呈现红褐色，其最大吸收峰位于465 nm。当G250与蛋白质分子中的碱性氨基酸（尤其是精氨酸）和芳香族氨基酸残基结合时，染料通过疏水作用和静电作用嵌入蛋白质的疏水区域，形成稳定的染料-蛋白复合物。该复合物的最大吸收峰由465 nm移至595 nm，溶液颜色由红褐色转变为蓝色。在一定蛋白质浓度范围内（通常为1–1500 μg/mL），595 nm处的吸光度与蛋白质浓度呈良好的线性关系。通过测定待测样品在595 nm的吸光度，并对比由标准蛋白（如BSA）绘制的标准曲线，即可定量计算样品的蛋白质浓度。
技术流程/Procedure
以微孔板酶标仪法为例：
1. 用PBS将待测蛋白样品进行适当稀释，可多做几个梯度（如2、4、8倍）。
2. 定量检测：
a. 加样：将各标准品及样品以5 μL/孔加至96孔板中；
注意：需设置空白对照，该孔添加5 μL稀释液。
b. 显色：每孔加入250 μL Bradford染色液，充分混匀。盖上板盖，室温静置孵育5 min， 即可检测；
c. 读值：酶标仪读取波长595 nm处光吸收值。
3. 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度：
a. 以最小二乘法绘制标准曲线（应舍弃明显离群的数值），线性方程的R² ≥ 0.99时方可使用该方程计算蛋白质含量；
b. 将样品吸光度代入线性方程，得稀释后蛋白浓度，最后乘以稀释倍数，得原始蛋白浓度。
产品优势/Highlights
✪ 极限检测
5 μL体积加样，3~5 min 显色，10 min内即可完成 96 孔板整板读数；
✪ 操作友好
含即用型系列浓度蛋白标准品，免稀释步骤，微孔板直读；
✪ 性能稳健
线性范围宽，低丰度蛋白亦可精准检出；
✪ 兼容性强
兼容金属离子、还原剂、螯合剂及去污剂。细胞裂解液、组织匀浆、分泌蛋白等生物样品均适用。
