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Q:原位杂交完全无杂交信号,探针孵育后没有阳性显色怎么办?
A:原位杂交无任何阳性信号,多由样本固定不当、组织过度脱蜡、探针变性不充分、杂交温度与时间不合适、蛋白酶消化不足导致靶核酸无法暴露;实验需控制 4% 多聚甲醛适度固定,保证组织彻底梯度脱蜡,探针经高温变性后再复性,严格设置适宜杂交温度并保证足够孵育时长,优化蛋白酶 K 消化浓度与时间充分暴露靶位点,同时设置阳性组织对照排查探针有效性,即可正常出现特异性杂交信号。
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